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变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)

变性梯度凝胶电泳法(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)分析PCR产物,如果突变发生在最先解链的DNA区域,检出率可达100%,检测片段可达1kb,最适围为100bp-500bp。变性梯度凝胶电泳法原理基于当双链DNA在变性梯度凝胶电泳中进行到与DNA变性温度一致的凝胶位置时,DNA发生部分解链,电泳迁移率下降,当解链的DNA链中有一个碱基改变时,会在不同的时间发生解链,因影响电泳速度变化的程度而被分离。由于变性梯度凝胶电泳法是利用温度和梯度凝胶迁移率来检测,需要一套专用的电泳装置,合成的PCR引物最好在5`末端加一段40bp-50bp的GC夹,以利于检测发生于高熔点区的突变。

DGGE变性梯度凝胶电泳主要应用于环境样品细菌、古细菌、真菌、真核微生物的多样性分析(土壤、水等样品无需培养,直接提取DNA扩增检测)动、植物体内外共生微生物的检测;食品微生物的检测;医学领域碱基突变的检测,杂合子检测等等。



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