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逆转录病毒

原理;通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞表面的受体相互作用而进入宿主细胞,之后反转入酶启动合成DNA并随机整合到宿主基因组。主要应用于稳定转染和特定宿主细胞,可用于难转染的细胞、原代细胞,体内细胞等,但携带基因不能太大(<8kb),细胞需处分裂期,需考虑安全因素。

逆转录病毒 (Retrovirus) 是一类已知的RNA 病毒。需在逆转录酶的作用下首先将RNA 转变为cDNA,再在DNA 复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增的一类病毒。该载体系统有两部分组成,一是带有外源基因的重组反转录病毒载体分子,二是能以反式提供病毒结构蛋白的包装细胞,其要求是能高效产生感染靶细胞的重组病毒颗粒,且无野生型的反转录病毒存在,后者是基因治疗安全性的关键问题。
逆转录病毒载体最大优点是:
(1) 转染范围广,可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等;
(2) 转入的外源基因可完全整合;
(3) 对细胞感染率高,达到100 %;
(4) 感染细胞不产生病变,可建立细胞系长期持续表达外源基因。
逆转录病毒载体的不足之处,如:
(1) 只能整合至分裂期细胞;
(2) 可插入外源基因片断小(<10kb),难以满足较大基因的插入;
(3) 病毒滴度是限制临床应用的主要方面;
(4) 有产生野生型病毒或辅助型病毒的可能,随机整合可能产生不良作用。



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