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pGEM?-T Easy Vector System II

 
包装: 20 reactions
运保温度: 感受态-70℃;其他组分-20℃或-70℃
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运费与支付说明:

1.含干冰类产品有运费;

2. 必须现金付款或有信用额度的会员才可以直接发货,否则需要等待现金付款信息。

其它组分:

pGEM®-T Easy Vector【子货号:A137A,包装:1 x 1.2μg,,运保温度:-20℃】
Control Insert DNA【子货号:A363A,包装:1 x 12μl,,运保温度:-20℃】
T4 DNA Ligase【子货号:M180A,包装:1 x 100u,,运保温度:-20℃】
2X Rapid Ligation Buffer【子货号:C671A,包装:1 x 200μl,,运保温度:-20℃】
JM109 Competent Cells, High Efficiency【子货号:L200A,包装:6 x 200μl,,运保温度:-70℃】


描述:

pGEM® -T Easy 载体系统是克隆PCR 产物的方便系统。它除了具有pGEM® -T 载体系统(Cat.# A3600,A3610) 所有的优势外,在插入位点两侧分别有EcoRI 和NotI 酶切位点,便于通过选择单酶切释放插入的DNA。pGEM® -T Easy载体系统II 除了pGEM® -T Easy载体系统I 所有成分外,还包括JM109 感受态细胞。

特点:

灵活:pGEM®-T Easy 载体多克隆位点两侧分别有BstZI, EcoRI和NotI 酶切位点,便于通过选择单酶切释放插入的DNA。

快速连接:使用2X 快速连接缓冲液(2X Rapid Ligation Buffer)可以使连接反应在室温下1 小时内完成。

蓝/ 白筛选:载体包含有T7 和SP6 RNA 聚合酶启动子,分别位于β - 半乳糖苷酶的α - 肽编码区内多克隆位点的两侧。α - 肽的插入失活允许在指示培养基上用颜色直接筛选重组克隆。

f1 复制起始位点:可用于制备单链DNA。


注意事项:

1. 在使用pGEM®-T 和pGEM®-T Easy 载体连接时只能使用本系统提供的
Promega 公司T4 DNA连接酶。其他商用的T4 DNA连接酶可能具有外切
酶活力,造成载体的末端胸腺嘧啶被除去。
2. 2×快速连接缓冲液含有ATP,在温度波动时ATP易降解。可将缓冲液分
装成一次用量的小管,这样可避免反复冻融及经常的温度变化。
3. 在每次使用2×快速连接缓冲液时一定要用混悬器混匀。
4. 长孵育时间可增加转化子的数目,一般4℃孵育过夜可得到更多的转化子。
5.一定要使用高效率的感受态细胞(1×108cfu/µg DNA)进行转化,建议使用JM109 高效感受态细胞(产品目录号:L2001)


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参考文献

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