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电泳原理:物质分子在正常情况下一般不带电,即所带正负电荷量相等,故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下,某些物质分子会成为带电的离子(或粒子),不同的物质,由于其带电性质、颗粒形状和大小不同,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,因此可使它们分离。

常见电泳仪:稳压稳流电泳仪、全自动乙纤膜电泳仪、全自动荧光/可见光双系统电泳仪、全自动琼脂糖电泳仪、双向电泳及双向电泳-液相色谱-质谱联用、高效毛细管电泳及高效毛细管电泳-质谱联用、毛细管电泳芯片、DNA测序系统等。

常用的电泳方法:

1.纸电泳

纸电泳(paper electrophoresis,PE)是指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是最早使用的区带电泳,由于操作简单方便,因此在很多领域得以广泛应用。比如,分离、确定某些蛋白质,如糖蛋白、脂蛋白等,尤其是在分离氨基酸的混合物时,PE是一种很有价值的分析技术。

2.醋酸纤维素薄膜电泳

醋酸纤维素是指纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素乙酸酯,由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。

3. 凝胶电泳

由区带电泳中派生出的一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式,被称为凝胶电泳。因此,该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。在临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的检测。

4. 等电聚焦电泳

一种利用有pH值梯度的介质,分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。因为这种电泳方法具有很高的分辨率,所以在等电点上只要有0.01pH单位的差异就能被满意地分离。因此,特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。

等电聚焦电泳法的特点:

①使用两性载体电解质,在电极之间形成稳定、连续、线性的pH梯度;②由于“聚焦效应”,即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面;③电泳速度快;④分辨率高;⑤加入样品的位置可任意选择;⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用于中、大分子量(如蛋白质、肽类、同工酶等)生物组分的分离分析。

5.等速电泳

等速电泳(isotachophoresis,CITP)是一种“移动界面”电泳技术。是电泳中惟一的分离组分与电解质一起向前移动,同时进行分离的电泳方法。

6.双向电泳

双向电泳(two-dimensionalgelelectrophoresis,2-DE)技术又称二维电泳技术,是目前常用的唯一一种能够连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的方法,第一向采用等电聚集电泳。第二向采用了SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳。广泛应用于生物学研究的各个领域。

7.免疫电泳

免疫电泳是电泳分析与沉淀反应的结合产物。该技术有两大优点:一是加快了沉淀反应的速度,二是将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而将其分开,再与抗体起反应,从而使本法更为微量化、多样化。因此,其应用范围日益扩大。

8.毛细管电泳

溶液中的带电粒子以高压电场为驱动力,沿毛细管通道,以不同速度向与其所带电荷相反的电极方向迁移,并依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离。



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