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核酸电泳缓冲液包括电泳缓冲液和加样缓冲液

    电泳缓冲液(running buffer)在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应,负极发生的是还原反应,长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,是溶液两极的pH保持基本不变。 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移。 此外,电泳缓冲液中含有的EDTA,能够螯合Mg2+ ,抑制DNase,保护DNA,防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。常见的核酸电泳缓冲液有:TAE、TBE和TPE等。

    TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE价格低廉,但长时间电泳(如过夜)不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。

    TBE的特点是缓冲能力强,长时间电泳时可选用TBE,并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用,并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低,所以不宜在回收电泳中使用。

    TPE的缓冲能力也较强,但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出,所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用

 

加样缓冲液(loading buffer)

    甘油、溴酚蓝指示剂以及DNA稳定剂按一定比例混合而成,经去核酸酶处理,适用于DNA样品的电泳检测,也可用于RNA样品的非变性电泳检测。指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;此外,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。

 

特别注意

    电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲性能下降,可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
 

 

 



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