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实验名称:PCR聚合酶链式反应

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描述:

 

实验目的:(1)钓取目的基因用于克隆表达载体的构建。(2)检测目的基因是否表达。

 

实验原理:PCR是在试管中进行的DNA复制反应,基本原理与细胞内DNA复制相似,但反应体系相对较简单。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①变性:模板DNA加热至94℃左右后,使DNA双链解离成单链,以便它与引物结合。②退火:变性后温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合,形成局部双链。③延伸:DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新链。

实验材料:模板DNA

 

实验试剂:DNA聚合酶,聚合酶buffer,dNTP,ddH2O,引物,氯化镁

 

仪器耗材:PCR仪,移液枪,掌上离心机,PCR管,枪头

 

 



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