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限制性酶切和连接

在分子克隆实验中,限制性酶切和连接克隆是将双链DNA片段从一个质粒移至另一个质粒的一种简单便捷的方法。限制性酶 (RE) 可以切割目标DNA内特定的4至8碱基对的反向重复识别序列的双链DNA。  DNA切割产物为平末端或含有5’或3’突出端。不管限制性酶切形成的末端类型如何,切割DNA形成片段均含有3´羟基和5´磷酸基。  DNA连接酶可利用依赖于ATP的反应将5’磷酸基共价连接至3’羟基上,使两个DNA片段相连。

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