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DNA纯化

    为了研究DNA分子在生命代谢中的作用,常常需要从不同的生物材料中提取DNA。由于DNA分子在生物体内的分布及含量不同,要选择适当的材料提取DNA。动植物中,小牛胸腺、动物肝脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物中,谷氨酸菌体含7%~10%,面包酵母含4%,啤酒酵母含6%,大肠肝菌含9%~10%。

    从各种材料中提取DNA方法不同,分离提取的难易程度也不同。对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容易,多数病毒DNA 分子量较小,提取时易保持其结构完整性。从细菌及高等动植物中提取DNA难度大一些。细菌DNA 分子量较大,一般达2×10 道尔顿。因此易被机械张力剪断。细菌DNA,除基因组DNA 外,还有质粒DNA 等。细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种:①机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法:用SDS处理细胞; ③酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。

    由于高等动物DNA 主要存在于细胞核与线粒体中,所以提取时有两个困难(高等植物与此类似):①破碎细胞难;从处死动物٠分离组织器宫到破碎细胞费时长。在此时期间DNA 可能会被DNase降解,而动物组织:特别是肌肉组织很难破碎,即使是较易破碎的肝٠肾等组织也往往使用组织匀浆器,易造成DNA 断裂。②分子量大,一般比细菌的大2—3个数量级,比病毒的大4—5个数量。对不同生物材料,要根据具体情况选择适当的分离提取方法。

    DNA提取的几种经典方法:

(1)浓盐法

(2)阴离子去污剂法:

(3)苯酚抽提法:

(4)水抽提法:

质粒 DNA 纯化

基因组 DNA 纯化

普通基因组DNA提取
   使用不同原理提取 1、试剂法 2、柱膜法(SV)抽真空或离心 3、树脂法 ...
高通量大体积基因组DNA提取
   手动或自动化提取 高通量,大体积实验。
血液基因组DNA提取
   可从新鲜或冷冻血液提取
组织及拭子基因组DNA提取
   鼠尾及口腔拭子
FFPE石蜡切片基因组DNA提取
   石蜡切片
PCR 产物纯化
核酸胶回收
测序反应纯化
序列特异性 DNA 纯化
寡核苷酸和小片段核苷酸纯化
纯化的DNAs
 

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