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Transfection 方法

 转染——让克隆的核酸进入真核细胞中,已经成为研究和控制真核细胞基因表达的重要手段。比如表达纯化特定的蛋白;鉴定一个基因的生物学特性;突变分析;研究基因表达对细胞生长的影响,研究基因表达的调控机制等等。根据不同的实验目的,外源DNA导入哺乳动物细胞又可分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染一般是指外源基因进入受体细胞后,存在于游离的载体上,不整合到染色体,在外源DNA导入细胞1—4天后收获转染细胞对转染基因的转录和复制进行分析。而稳定转染则需要使外源基因整合于细胞染色体从而得到稳定的转染细胞株。

 

转染方法 原理 特点 应用
DEAE-右旋糖苷法  带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞  瞬时性转染 相对简便、结果可重复,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清 
 磷酸钙法 磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞  稳定转染,瞬时性转染 不适用于原代细胞,操作简便但重复性差,有些细胞不适用 
阳离子脂质体法 带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞  稳定转染,瞬时性转染,所有细胞  适用性广,转染效率高,重复性好,但转染时需除血清。转染效果随细胞类型变化大
病毒介导法  通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中 稳定转染  可用于难转染的细胞、原代细胞,体内细胞等
逆转录病毒    特定宿主细胞 但携带基因不能太大细胞需处分裂期,需考虑安全因素 
 腺病毒 通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中  瞬时转染,特定宿主细胞  可用于难转染的细胞,需考虑安全因素
电穿孔法 高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA通过膜上形成的小孔导入 稳定转染,瞬时性转染,所有细胞  适用性广但细胞致死率高,DNA和细胞用量大, 需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件
Biolistic颗粒传递法 将DNA用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞,DNA在胞内逐步释放,表达  瞬时性转染 可用于:人的表皮细胞,纤维原细胞,淋巴细胞系以及原代细胞
显微注射法  用显微操作将DNA直接注入靶细胞核 稳定转染,瞬时性转染  
阳离子聚集物

带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,并通过内吐作用进入细胞

稳定转染,瞬时转染,所有细胞 除了具有阳离子脂质体的转染效率高,操作简单,适用范围广,重复性好等特点外,还具有在体内转染效率高,细胞毒性低等特点,是新一代的转染试剂。

 

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